Цоликлоны – моноклинальные антитела, которые были получены из крови мышей с помощью генной инженерии и используются для определения группы крови системы АВО и резус-фактора.
Цоликлоны, в противовес стандартным сывороткам, отличаются высокой активностью и авидностью (временем наступления, а также выраженностью склеивания (реакции агглютинации).
Основные цоликлоны:
- Анти-A,
- Анти-B,
- Анти-AB,
- Анти-0 и т.д.
По цоликлонам определяют резус-фактор и группы крови.
Техника определения групп с помощью цоликлонов
Определение данным методом производится в лабораторных условиях. Температура воздуха должна находиться в пределах +15 – + 25 градусов по Цельсию. Исследование должно проводиться при достаточно хорошем освещении.
Реагенты необходимо хранить плотно закрытыми, так как при высыхании значительно снижается активность антител.
Нельзя использовать содержащие хлопья и мутные реагенты. Для каждого из реагентов требуется отдельная пипетка.
Анализ проводится на белой тарелке или планшете с хорошо смачиваемой поверхностью. Благодаря высокой активности и авидности цоликлонов, есть возможно применение по серии реагентов анти-A и анти-B.
На планшете нужно сделать надписи с названиям антигенов анти-A/анти-B. Далее снизу от соответствующих надписей капают примерно 0,1 миллилитр цоликлонов. У реагента анти-A цвет желтовато-розовый, у анти-B – синий.
Определение групп крови
Возле моноклональных антител капают по одной капле крови, смешивают ее уголком предметного стекла или стеклянной палочкой с реагентами. Перед дальнейшим смешиванием пар капель необходимо тщательно промыть и насухо вытереть стекло или палочку.
Наблюдение за процессом агглютинацией ведут в течение 2,5 минут, при этом тарелку или планшет нужно слегка покачивать. По истечении времени оценивают результат. Стоит отметить, что наблюдения за агглютинацией не требуют каких-либо специальных приспособлений.
Агглютинаты достаточно хорошо видны даже невооруженным глазом, быстро сливаясь и образуя большие хлопья. В случае, если не происходит склеивания, капля реагента приобретает равномерную окраску красного цвета.
Расшифровка результатов
Таблица сопоставления группы крови и цоликлона позволяет разобраться в результатах.
Цоликлон I положительная I отрицательная II положительная II отрицательная III положительная III отрицательная IV положительная IV отрицательная
| Анти-А | + | + | + | + | ||||
| Анти-В | + | + | + | + | ||||
| Анти-D | + | + | + | + |
- Если отсутствует агглютинация (с анти-A и анти-B), эритроциты не содержат антигенов A и Б. Это I группа крови,
- Если есть агглютинация только с анти-A, эритроциты содержат лишь антиген A, что характеризует II группу крови,
- Если агглютинация только с анти-B, красные клетки содержат антиген B, что характеризует III группу,
- Если наблюдается агглютинация c обоими цоликлонамми анти-A и анти-B, эритроциты содержат оба антигена. С целью исключения аутоагглютинации необходимо провести контрольную процедуру: в этом случае смешивают 0,1 миллилитр изотонического раствора хлорида натрия и 0,01 миллилитр исследуемой крови. Если реакция агглютинации отсутствует, определяется IV группа.
Расшифровка результатов
Определение резус-фактора
Для определения резус-фактора наносят на планшет большую каплю анти-D-супе, возле нее – маленькую каплю (меньше в десять раз) исследуемой крови. Производят смешивание и оценивают полученный результат. Если реакция агглютинации началась, данная методика определяет кровь как резус-положительную, если резус-фактор отрицательный – агглютинации нет.
Определение резус-фактора
Препараты цоликлонов
Выделяют эритротест-цоликлон анти-D.
Существуют три разновидности:
- Обычный анти-D-цоликлон. При его добавлении развивается реакция непрямой агглютинации,
- Супер. Вызывает прямую агглютинацию,
- Препарат анти-D-микс, имеющий в составе компоненты обычного и супер цоликлона анти-D). С их помощью можно как выявить группу крови, так и определить резус-принадлежность крови.
Отличие других растворов состоит в названии, поскольку входящие в их состав антитела – иммуноглобулины М и G – предоставляют возможность только произвести типизацию крови по антигенам АВ0. Различие заключается исключительно в механизме слипания эритроцитов (агглютинация прямая/непрямая).
У каждого из этих препаратов есть свои собственные особенности использования и срок годности. Однако наибольшей популярностью в лабораторной клинической диагностике пользуются только 3 вышеуказанных препарата (анти-А, анти-В, анти-D).
Как определить группу в случае неверной трактовки результатов анализа
Иногда возможно получение недостоверных, ложных результатов. К примеру, если при добавлении к препарату крови изменился их цвет или если агглютинация наблюдается во всех ячейках планшетки.
Чтобы предотвратить такие результаты, если выполняется определение группы цоликлонами, алгоритм действий предусматривает определенные правила. Сначала следует посмотреть на срок обращения цоликлонов. Недопустимо использовать реагенты, у которых истек срок годности.
Обязательно нужно соблюдать и все условия правильного проведения процедуры. Помещение должно иметь хорошо оборудованное рабочее место с температурным режимом и достаточным освещением. Если инструкция к препарату содержит указания и касательно требуемой влажности, следует учитывать и данный фактор.
Немалое значение имеет и чистота планшетки, так как ее загрязнение может привести к возникновению ошибок в исследовании и, как следствие, к получению неверных результатов.
Где можно провести анализ?
Определение группы цоликлонами постепенно приобретает все большую популярность. Если раньше эта процедура проводилась исключительно в специализированных стационарах (к примеру, только в отделениях гематологии и хирургии), то сейчас процедура доступна почти в любой достаточно оборудованной лаборатории.
Методика цоликлонов находит применение и в поликлиниках. Там ее включают различные методы экспресс-определения группы крови, проводимые с целью скорейшего выставления пациенту диагноза.
На платной основе проведение этой услуги предлагают и многие центры косметологии и частной медицины. Бесплатно данная процедура, как было сказано выше, проводится по направлению терапевта или лечащего врача.
Если отсутствует возможность обратиться за анализом крови в поликлинику, исследование можно провести и самостоятельно при наличии набора препаратов и специальной планшетки. Однако необходимо помнить, что для получения достоверных результатов требуется соблюдать условия процедуры, в особенности это касается стерильности.
Видео
(1 оценок, среднее: 5,00 из 5)
Загрузка...