В современной медицине группа крови характеризует набор расположенных на поверхности эритроцитов антигенов, которые определяют их специфичность.
Существует огромное количество таких антигенов (обычно применяется таблица групп крови с разнообразными антигенами), но повсеместно производится определение группы крови с использованием классификации по резус-фактору и системе АВ0.
Определение группы является обязательной процедурой при подготовке к любой операции. Такой анализ также необходим при поступлении на службу в некоторые контингенты, среди которых военные, работники внутренних органов и силовых структур. Данное мероприятие проводится из-за повышенного риска возникновения состояния, угрожающего жизни человека, в целях сокращения времени, требуемого для оказания помощи в виде переливания крови.
Состав крови различных групп крови
Суть системы АВ0 состоит в наличии структур антигенов на эритроцитах. В плазме нет соответствующих им типовых антител (гамма-глобулинов). Поэтому для исследования крови можно использовать реакцию «антиген + антитело».
Эритроциты склеиваются в момент встречи антигена и антитела. Подобная реакция носит название гемагглютинации. Реакция отображается в виде небольших хлопьев при проведении анализа. Исследование основано на получении изображения агглютинации с сыворотками.
Связываются антигены эритроцитов «А» с антителами «ά», а также «В» с «β» соответственно.
Выделяются следующие группы крови по составу:
- I (0) – ά, β — поверхность эритроцитов совсем не содержит антигенов,
- II (А) – β — на поверхности имеется антиген А и антитело β,
- III (В) – ά — поверхность содержит В с антителом типа ά,
- IV (АВ) – 00 — поверхность содержит оба антигена, однако не имеет антител.
Определение групп крови
Антигены есть у зародыша уже в состоянии эмбриона, а агглютинины (антитела) появляются на первом месяце жизни.
Методы определения
Стандартный метод
Существует множество техник, однако в лаборатории обычно используют определение с помощью стандартных сывороток.
Метод по стандартным сывороткам используется для определения типов антигенов АВ0. Состав стандартной изогемагглютинирующей сыворотки содержит набор антител к молекулам эритроцитов. В случае наличия антигена, который подвержен действию антител, формируется комплекс антиген-антитело, что запускает каскад реакций иммунитета.
Результатом данной реакции является агглютинация эритроцитов, на основании характера происходящей агглютинации можно определить принадлежность образца к какой-либо группе.
Для приготовления стандартной сыворотки используется донорская кровь и определенная система — посредством выделения плазмы, включающей антитела, и последующего ее разведения. Разведение выполняется с использованием изотонического раствора натрий хлорида.
Разведение производится так:
- В пробирку, содержащую 1 миллилитр 0.9 %-го раствора пищевой соли, необходимо добавить 1 миллилитр плазмы. Раствор тщательно перемешать.
- Затем пипеткой отбирают полученный раствор плазмы в объеме 1 миллилитр. Добавляют его в пробирку, которая содержит изотонический раствор. Так необходимо достигнуть разведения плазмы с соотношением 1 к 256. Применение других разведений несет риск возникновения диагностической ошибки.
Непосредственно исследование проводится таким образом:
- На специальный планшет помещают по капле каждой сыворотки (общим объемом примерно 0.1 миллилитр) на участок, где имеется соответствующая пометка (применяются 2 образца, из них один – контрольный, второй предназначен для исследования).
- Затем рядом с каждой каплей сыворотки размещают исследуемый образец в объеме 0.01 миллилитра, после чего его по отдельности смешивают с каждым диагностикумом.
Правила расшифровки результатов
Спустя пять минут можно производить оценку результатов исследования. В больших каплях сыворотки происходит просветление, в одних наблюдается реакция агглютинации (образуются мелкие хлопья), в других – нет.
Видео: Определение группы крови и резус-фактора
Здесь возможны варианты:
- Если реакции агглютинации нет в обеих пробах с сыворотками II и III (+ контрольные 1 и IV) — определение первой группы,
- Если свертывание наблюдается во всех пробах, кроме II — определение второй,
- При отсутствии реакции агглютинации только в пробе с III группы — определение III,
- Если свертываемость наблюдается во всех пробах, в том числе в IV-контрольной — определение IV.
Когда сыворотки располагаются в правильном порядке и на тарелке стоят подписи, ориентироваться легко: группа соответствует местам с отсутствующей агглютинацией.
В некоторых случаях склеивание неясно различимо. Тогда анализ необходимо переделать, мелкую агглютинацию наблюдают под микроскопом.
Метод перекрестной реакции
Суть этой техники состоит в определении агглютиногенов при помощи стандартных сывороток или цоликлонов с параллельным определением агглютининов с помощью эталонных эритроцитов.
Техника анализа перекрестным методом практически не имеет отличий от исследования с помощью сывороток, но присутствуют некоторые дополнения.
На планшетку под сыворотками необходимо добавить по капле стандартных эритроцитов. Затем из пробирки с кровью пациента, прошедшую через центрифугу, пипеткой извлекают плазму, которую помещают к стандартным эритроцитам, находящиеся на дне – добавляют в стандартную сыворотку.
Так же, как и согласно технике стандартной методики, результаты исследования оценивают спустя несколько минут после начала реакции. В случае наличия реакции агглютинации можно говорить о наличии агглютининов АВ0, в случае реакции плазмы можно судить об агглютиногенах.
Результаты исследования крови с применением стандартных эритроцитов и сывороток:
| Наличие агглютинации при реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками | Наличие агглютинации при реакции со стандартными эритроцитами | Группы крови |
| 0(I) | A(II) | B(III) | AB(IV) | 0(I) | A(II) | B(III) | |
| – | – | – | — | – | + | + | 0(I) |
| + | – | + | — | – | – | + | A(II) |
| + | + | – | — | – | + | – | B(III) |
| + | + | + | – | – | – | – | AB(IV) |
+ агглютинация,
– агглютинация отсутствует,
реакцию не проводят.
Перекрестный метод получил распространение за счет того, что он предотвращает диагностические ошибки, возникающие при применении стандартных методик.
Определение группы крови цоликлонами
Цоликлоны — синтетические заменители сывороток, которые содержат в своем составе искусственные заменители агглютининов типов ά и β. Они называются эритротестами «Цоликлон анти-А» (имеют розовый цвет), а также «анти-В» (имеют синий цвет). Ожидаемая агглютинация наблюдается между агглютининами цоликлонов и эритроцитами крови.
Цоликлоны
Данная методика не требует двух серий, она является более надежной и точной. Проведение исследования и оценка его результатов происходят так же, как и в стандартном методе.
| Вид цоликлонов | Группа крови |
| Результат агглютинации | Анти-А | Анти-В | |
| — | — | 0(I) | |
| + | — | A(II) | |
| — | + | B(III) | |
| + | + | AB(IV) |
IV группа (АВ) обязательно подтверждается агглютинацией с цоликлоном «анти-АВ», а также отсутствием склеивания эритроцитов в изотоническом растворе натрия хлорида.
Экспресс-методика с помощью набора «Эритротест-группокарт»
Хотя общепринятые способы определения принадлежности крови к конкретной группе распространены повсеместно, в современной медицине происходит внедрение экспресс-методов, самым распространенным из которых является “Эритротест”.
При определении группы с применением методики “Эритротест группокарт” необходим комплект инструментов, включающий следующие приборы:
- Планшетка, имеющая с пять лунок, для произведения определения группы по ее резус-принадлежности и системе АВ0,
- Скарификатор, предназначенный для получения образца, необходимого для исследования,
- Стеклянные палочки для перемешивания образцов,
- Чистая пипетка для набора растворов.
Все перечисленные инструменты необходимо для безошибочного проведения диагностики.
Набор для анализа крови “Эритротест-группокарт” позволяет проводить исследование резус-фактора и определение группы крови в любых условиях, она особенно эффективна при отсутствии возможности использования общепринятых методов.
В лунках на планшетке расположены цоликлоны к антигенам (это цоликлоны анти-А, -В, -АВ) и к основному антигену, который обуславливает наследование резус-фактора (это цоликлон анти-D). Пятая лунка содержит контрольный реагент, который позволяет предотвратить возможные ошибки и грамотно определить принадлежность к группе крови.
Видео: Определения групп крови с помощью цоликлонов
(1 оценок, среднее: 5,00 из 5)
Загрузка...